外泌體上的TNF家族蛋白不能被膜型金屬蛋白酶切割,故較為穩(wěn)定,同時(shí)借助膜形成三聚體,具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性。而且,人們認(rèn)為外泌體的轉(zhuǎn)運(yùn)TNF家族蛋白,與各種炎1癥疾病和自身免1疫疾病的產(chǎn)生相關(guān)。
例如,組織外泌體提取技術(shù)服務(wù),從類風(fēng)1濕關(guān)1節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞中釋放出來的外泌體上,聚集高濃度的膜結(jié)合型TNF-α,會(huì)加重類風(fēng)1濕關(guān)1節(jié)炎病情。
樣本準(zhǔn)備
1. 提供外泌體懸液即可,未純化樣本也可以上機(jī)檢測(cè);
注意:NTA僅提供粒徑分布情況和顆粒濃度,無法區(qū)分外泌體與非外泌體成分;當(dāng)然也可先利用外泌體特異性標(biāo)記物進(jìn)行熒光標(biāo)記,則可以獲知外泌體特定亞群的含量。
2.儀器的檢測(cè)區(qū)間是10^7 particles/ml,且有濃度檢測(cè)下限,為10^5 particles/ml,進(jìn)樣量不少于2ml;一般來說,會(huì)對(duì)樣本稀釋后進(jìn)樣;
我司無法準(zhǔn)確建議送樣量;檢測(cè)需要量與樣本本身濃度有關(guān),樣本濃,則用量小,反之則多,根據(jù)檢測(cè)經(jīng)驗(yàn),樣本取用量一般在2μl-100μl不等,取用量大于50μl時(shí)大多由于樣本分泌量過低、提取失敗或者對(duì)樣本有過多稀釋。一般建議送樣量不低于30μl,如樣本珍貴,可聯(lián)系我司寄回,運(yùn)費(fèi)視具體情況收取。
國際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(huì)(ISEV) 在2014年的提議,對(duì)于提取獲得的外泌體,需要通過以下手段進(jìn)行確認(rèn):
雙層囊膜結(jié)構(gòu)是外泌體重要標(biāo)志之一,但普通光學(xué)顯微鏡難以觀察到此種亞顯微結(jié)構(gòu)。而透射電子顯微鏡 (Transmission electron microscope, TEM) 分辨率可達(dá)0.1 ~ 0.2 nm,可將被觀察物體放大至數(shù)百萬倍,非常適合進(jìn)行外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀測(cè)。
表觀生物技術(shù)團(tuán)隊(duì)擁有豐富的外泌體電鏡樣本處理與鑒定經(jīng)驗(yàn),可為客戶提供高質(zhì)量外泌體TEM檢測(cè)服務(wù),獲得樣本中外泌體典型形態(tài)特征圖片 (如圖一)。
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