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分子病理技術(shù)服務(wù)-武漢科銳諾生物

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后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），分子病理技術(shù)服務(wù)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。

  原位雜交的預(yù)雜交：濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體，不洗。

   雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專1用蓋玻片的保護(hù)膜揭開(kāi)后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過(guò)夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。

雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。

        

目前，我國(guó)已穩(wěn)定開(kāi)展的分子病理技術(shù)主要有顯色原位雜交、熒光原位雜交、PCR、熒光定量PCR、基因芯片和DNA測(cè)序技術(shù)。顯色原位雜交(chromogenicinsituhybridization，CISH)技術(shù)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合產(chǎn)生的一門(mén)新興技術(shù)，是利用核酸分子單鏈間堿基互補(bǔ)的原理，將地1高辛或生物素標(biāo)記的外源核酸探針與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì)，結(jié)合成雙鏈雜交分子，通過(guò)過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶的呈色反應(yīng)將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來(lái)。根據(jù)探針?lè)N類不同可分為DNA原位雜交和RNA原位雜交。

原位末端凋亡檢測(cè)（Tunel）

實(shí)驗(yàn)原理： TUNEL技術(shù)可對(duì)組織或細(xì)胞中凋亡小體或單個(gè)凋亡細(xì)胞進(jìn)行染色，能準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。凋亡細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被而將自身染色體DNA切斷成缺口或3-OH末端片段這一特點(diǎn)，利用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶將標(biāo)有標(biāo)記物(如，生物素或熒光素)的脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移到3-OH末端，再用組化法或熒光檢測(cè)凋亡細(xì)胞。

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