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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
原位雜交的預(yù)雜交：濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體，不洗。
雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專1用蓋玻片的保護膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。
雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
原理
根據(jù)抗原反應(yīng)和化學(xué)顯色原理，組織切片或細胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進行反應(yīng)，前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合，后通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細胞或組織中化學(xué)成分，在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。
在酵母雙雜交系統(tǒng)中，BD與X蛋白融合，AD與Y蛋白融合，如果X、Y之間形成蛋白-蛋白復(fù)合物，AD與BD會在空間上充分接近，重新構(gòu)成結(jié)構(gòu)域，玉米原位雜交技術(shù)服務(wù)，啟動報告基因的轉(zhuǎn)錄。擁有BD質(zhì)粒的酵母可以在某一缺陷培養(yǎng)基上生長，擁有AD質(zhì)粒的酵母菌可以在另一種缺陷培養(yǎng)基上生長，通過接合（mating）或共轉(zhuǎn)化使酵母同時擁有AD與BD質(zhì)粒。如果BD上的目的蛋白與AD上的誘餌蛋白存在相互作用，這樣的酵母可以在三缺及四缺的培養(yǎng)基上生長，并啟動β-半乳糖苷酶基因的轉(zhuǎn)錄。
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第3年
