1、組織取材:組織取材應盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快,所以新鮮組織和培養(yǎng)細胞在30 min 內(nèi)固定。
2、細胞組織固定目的與注意事項:
(1)保持細胞結構;
(2)大限度地保持細胞內(nèi)DNA或RNA的水平;
(3)使探針易于進入細胞或組織。
常用的固定劑是多聚甲醛,水稻RNA原位雜交測試服務,與其它醛類固定劑不同,多聚甲醛不會與蛋白質產(chǎn)生廣泛的交叉連接,因而不會影響探針穿透入細胞或組織。
在酵母雙雜交系統(tǒng)中,BD與X蛋白融合,AD與Y蛋白融合,如果X、Y之間形成蛋白-蛋白復合物,AD與BD會在空間上充分接近,重新構成結構域,啟動報告基因的轉錄。擁有BD質粒的酵母可以在某一缺陷培養(yǎng)基上生長,擁有AD質粒的酵母菌可以在另一種缺陷培養(yǎng)基上生長,通過接合(mating)或共轉化使酵母同時擁有AD與BD質粒。如果BD上的目的蛋白與AD上的誘餌蛋白存在相互作用,這樣的酵母可以在三缺及四缺的培養(yǎng)基上生長,并啟動β-半乳糖苷酶基因的轉錄。
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