意義
免yi組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面:
(1)的診斷與鑒別診斷;
(2)確定轉(zhuǎn)移性的原發(fā)部位;
(3)對某類進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型;
(4)軟組織的一般需根據(jù)正確的組織學(xué)分類,因其種類多、組織形態(tài)相像,分子病理技術(shù)服務(wù),有時難以區(qū)分其組織來源,應(yīng)用多種標(biāo)志進(jìn)行組化研究對軟組織的診斷是不可缺少的;
(5)發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶,有助于臨床方案的確定,包括手術(shù)范圍的確定。
(6)為臨床提供方案的選擇。
原位雜交第二天
1.
1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)。
2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分鐘,重復(fù)一次。
3)置換2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。
4)置換0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復(fù)一次。
2.
1)用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動。
2)室溫下加1ml 1:2:7溶液,時間為一小時。
3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連,4C 冰箱過夜。
既要充分保留被測核酸,(特別是RNA)不被降解,又要盡可能維持原有組織或細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
步驟:基本與免1疫組織化學(xué)技術(shù)相似,即組織要求新鮮和迅速投入固定液。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。標(biāo)本較大時用刀片切成厚度不超過4mm的小塊,固定1小時即可,較大的標(biāo)本固定不要超過2小時。某些組織對過度固定尤其敏感,如動物大腦,固定時間30-40分鐘,一般不要超過1小時。取材過程中避免手指、唾液和未經(jīng)RNA酶抑制處理的器具接觸標(biāo)本。冷凍切片以厚5~30um佳,40℃烤箱內(nèi)干燥2小時后儲存在-80℃超低溫冰箱,在-20℃可保存2~3周,在-70℃可保存數(shù)月之久。
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