外泌體的提取方式:
1、離心法:此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足。
2、過濾離心:這種操作簡單、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,但同樣純度不足。
3、密度梯度離心法:用此種方法分離到的外泌體純度較高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜
4、免1疫磁珠法:這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高、操作簡單,但生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性。
5、色譜法:此種方法分離出的外泌體大小均一,但設(shè)備特殊,應(yīng)用不廣泛。
抗原提呈中外泌體的作用
樹突狀細(xì)胞是免1疫系統(tǒng)中分泌外泌體活躍的細(xì)胞。樹突狀細(xì)胞是抗原提呈細(xì)胞的一種,能通過吞噬入1侵體內(nèi)的細(xì)菌等異物,在切斷抗原肽后,與 MHCⅡ類分子結(jié)合并提呈在細(xì)胞表面來激1活T細(xì)胞。細(xì)胞內(nèi)的抗原肽利用MHCⅠ類分子提呈,樹突狀細(xì)胞分泌的外泌體攜帶MHCⅠ類和Ⅱ類分子,exo粒徑測試服務(wù),它們分別與抗原特異性CD8+ 細(xì)胞殺傷性T細(xì)胞、CD4+ 輔助T細(xì)胞的T細(xì)胞受體結(jié)合,在遠(yuǎn)離樹突狀細(xì)胞處也可以激1活T細(xì)胞。
樣本準(zhǔn)備
1. 提供外泌體懸液即可,未純化樣本也可以上機(jī)檢測;
注意:NTA僅提供粒徑分布情況和顆粒濃度,無法區(qū)分外泌體與非外泌體成分;當(dāng)然也可先利用外泌體特異性標(biāo)記物進(jìn)行熒光標(biāo)記,則可以獲知外泌體特定亞群的含量。
2.儀器的檢測區(qū)間是10^7 particles/ml,且有濃度檢測下限,為10^5 particles/ml,進(jìn)樣量不少于2ml;一般來說,會(huì)對樣本稀釋后進(jìn)樣;
我司無法準(zhǔn)確建議送樣量;檢測需要量與樣本本身濃度有關(guān),樣本濃,則用量小,反之則多,根據(jù)檢測經(jīng)驗(yàn),樣本取用量一般在2μl-100μl不等,取用量大于50μl時(shí)大多由于樣本分泌量過低、提取失敗或者對樣本有過多稀釋。一般建議送樣量不低于30μl,如樣本珍貴,可聯(lián)系我司寄回,運(yùn)費(fèi)視具體情況收取。
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