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武漢科銳諾生物科技有限公司
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外泌體研究開展的如火如荼。不論是 SCI 文章的發(fā)表還是各類基1金的申請，外泌體相關(guān)研究表現(xiàn)都非常亮眼。外泌體提取后，研究人員面臨的一個重要問題就是，我提取的是不是外泌體？如果是的話，質(zhì)量如何？
現(xiàn)階段，對外泌體進(jìn)行鑒定主要有三種主流的方法：電鏡、粒徑和 Western blot 分析靶標(biāo)物。之前我們已經(jīng)對外泌體電鏡進(jìn)行了總結(jié)，今天我們來看看外泌體的粒徑分析。
外泌體粒徑分析原理
外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析（Nanoparticle tracking Analysis， NT A)，外泌體粒徑及濃度檢測，其原理是對每個顆粒的布朗運(yùn)動進(jìn)行追1蹤和分析，結(jié)合 Stockes-Einstein 方程式計算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NT A技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認(rèn)可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式，NT A技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。
外泌體可通過多種小分子進(jìn)行修飾，因此逐漸成為遞送治1療藥1物的有效載體。研究發(fā)現(xiàn)，GRP78 在索拉菲尼耐藥癌細(xì)胞中，相對于索拉菲尼敏感癌細(xì)胞中顯著過表達(dá)，因此，可能是 HCC 治1療的潛在靶點(diǎn)。
在這項研究中，錦州醫(yī)學(xué)院趙亮課題組通過修飾 BM-MSCs 以表達(dá)外泌體 siGRP78，證明了 siGRP78 修飾的外泌體與索拉1非尼聯(lián)合能夠靶向肝細(xì)胞癌細(xì)胞中的 GRP78 并抑制其生長和體外癌細(xì)胞的侵襲。此外，siGRP78 修飾外泌體與索拉1非尼聯(lián)合也抑制體內(nèi)癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。證明了 siGRP78 修飾的外泌體可以使索拉1非尼耐藥的癌細(xì)胞對索拉1非尼敏感并逆轉(zhuǎn)耐藥性。
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除了用NTA方法，該團(tuán)隊另基于acetylcholinesterase（一種已知的外泌體表達(dá)蛋白）評估三種試劑盒提取外泌體的得率。從NTA結(jié)果看，對于血1清和血漿樣本，Exo-spin的提取量高，是其他兩種試劑盒的1-3倍；相對來說，腦脊髓液的提取率都比較低，ExoQuick?提取得到的外泌體濃度低。從基于acetylcholinesterase的分析結(jié)果看，其數(shù)值高于NTA方法，且Exo-spin得到的外泌體濃度高于其他兩種試劑盒。
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