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武漢科銳諾生物科技有限公司
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在酵母雙雜交系統(tǒng)中，BD與X蛋白融合，AD與Y蛋白融合，如果X、Y之間形成蛋白-蛋白復(fù)合物，AD與BD會在空間上充分接近，重新構(gòu)成結(jié)構(gòu)域，啟動報告基因的轉(zhuǎn)錄。擁有BD質(zhì)粒的酵母可以在某一缺陷培養(yǎng)基上生長，擁有AD質(zhì)粒的酵母菌可以在另一種缺陷培養(yǎng)基上生長，通過接合（mating）或共轉(zhuǎn)化使酵母同時擁有AD與BD質(zhì)粒。如果BD上的目的蛋白與AD上的誘餌蛋白存在相互作用，這樣的酵母可以在三缺及四缺的培養(yǎng)基上生長，并啟動β-半乳糖苷酶基因的轉(zhuǎn)錄。
阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：滴加3%1甲1醇-H2O2，室溫避光孵育15min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。
雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針has-circ-ST6GALNAC6 probe 雜交液，濃度6ng/ul，恒溫箱37度雜交過夜。
雜交后洗滌：洗去雜交液，tunel技術(shù)服務(wù)，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌。
滴加封閉液：滴加封閉血1清（正常兔血1清），室溫30min。
滴加鼠抗地1高辛標(biāo)記過氧化物酶（anti-DIG-HRP）：傾去封閉液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min，后PBS洗3次×5min。
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第4年
