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水稻種子是人類重要的食物來源，其發(fā)育涉及一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，其中轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮了關(guān)鍵作用。MADS轉(zhuǎn)錄因子家族成員是植物花器1官發(fā)育的重要調(diào)控因子，已有的研究表明，幾乎所有的水稻MADS基因都在種子中表達(dá)，但對(duì)MADS家族成員參與水稻種子發(fā)育調(diào)控的研究結(jié)果仍比較少。
在這項(xiàng)研究中，研究組基于前期的表達(dá)譜研究基礎(chǔ)，分析得到了一個(gè)在水稻生殖發(fā)育階段優(yōu)先表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子MADS29。細(xì)致分析表明，MADS29在花藥、胚珠和種子中均表達(dá)，且在受精后的母體組織表達(dá)量高。MADS29的反義轉(zhuǎn)1基因植株呈現(xiàn)種子皺縮、淀粉粒形態(tài)異常、灌漿速率下降等表型。通過解剖學(xué)切片、末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記實(shí)驗(yàn)和全基因組表達(dá)譜芯片分析等，研究人員證明了MADS29通過調(diào)控程序化死1亡(PCD)過程促進(jìn)珠心細(xì)胞和珠心突起處的降解。進(jìn)一步的體外凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)顯示，MADS29能夠通過直接結(jié)合程序化死1亡相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域而調(diào)控其表達(dá)，進(jìn)而影響胚乳發(fā)育。
原位雜交（in situ hybridization）將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交，稱為原位雜交，使用DNA或者RNA探針來檢測(cè)與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。
原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列，將有放1射性或非放1射性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì)，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測(cè)手段將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備3個(gè)重要條件：組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物
后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），植物RNA原位雜交檢測(cè)服務(wù)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
原位雜交的預(yù)雜交：濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體，不洗。
雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專1用蓋玻片的保護(hù)膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。
雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
溫馨提示：以上是關(guān)于植物RNA原位雜交檢測(cè)服務(wù)-武漢科銳諾生物(圖)的詳細(xì)介紹，產(chǎn)品由武漢科銳諾生物科技有限公司為您提供，如果您對(duì)武漢科銳諾生物科技有限公司產(chǎn)品信息感興趣可以聯(lián)系供應(yīng)商或者讓供應(yīng)商主動(dòng)聯(lián)系您 ，您也可以查看更多與技術(shù)合作相關(guān)的產(chǎn)品！
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