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水稻種子是人類重要的食物來源，其發(fā)育涉及一個復雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，其中轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮了關(guān)鍵作用。MADS轉(zhuǎn)錄因子家族成員是植物花器1官發(fā)育的重要調(diào)控因子，已有的研究表明，幾乎所有的水稻MADS基因都在種子中表達，但對MADS家族成員參與水稻種子發(fā)育調(diào)控的研究結(jié)果仍比較少。
在這項研究中，研究組基于前期的表達譜研究基礎(chǔ)，分析得到了一個在水稻生殖發(fā)育階段優(yōu)先表達的轉(zhuǎn)錄因子MADS29。細致分析表明，MADS29在花藥、胚珠和種子中均表達，且在受精后的母體組織表達量高。MADS29的反義轉(zhuǎn)1基因植株呈現(xiàn)種子皺縮、淀粉粒形態(tài)異常、灌漿速率下降等表型。通過解剖學切片、末端轉(zhuǎn)移酶標記實驗和全基因組表達譜芯片分析等，研究人員證明了MADS29通過調(diào)控程序化死1亡(PCD)過程促進珠心細胞和珠心突起處的降解。進一步的體外凝膠阻滯實驗顯示，MADS29能夠通過直接結(jié)合程序化死1亡相關(guān)基因的啟動子區(qū)域而調(diào)控其表達，進而影響胚乳發(fā)育。
癌組織原位雜交實驗步驟：
1. 將準備做原位雜交的樣本常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8μm。
2. 玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。
3. 石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水。30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合，室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。
4. 暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶（1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻），37℃或室溫消化3--30分鐘（視標本新舊、厚薄自行調(diào)整）。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
原位雜交雜交液注意事項：
（1）雜交液內(nèi)除含一定濃度的標記探針外，還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。
（2）雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加，可以減低探針與組織標本之間的靜電結(jié)合。甲酰胺可使Tm降低，雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA：RNA，RNA：DNA，DNA：DNA的雜交溫度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以雜交液中加入適量的甲酰胺，可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結(jié)合，從而減少雜交液的有效容積，植物染色體原位雜交檢測服務(wù)，提高探針有效濃度，以達到提高雜交率的目的（尤其對雙鏈核酸探針）。
在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等，都是為了阻斷探針與組織結(jié)構(gòu)成分之間的非特異性結(jié)合，以減低背景。
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第4年
