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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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原位雜交第二天
1.
1）將探針回收，原位雜交檢測，放于－20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)。
2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。
3）置換2XSSCT1ml，染色體熒光原位雜交，60℃，放置15分鐘。
4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。
2.
1）用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。
2）室溫下加1ml 1：2：7溶液，時間為一小時。
3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過夜。
核酸原位雜交可根據(jù)其檢測物而分為細(xì)胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交；根據(jù)其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA， RNA-DNA， RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過組織細(xì)胞的固定，預(yù)雜交，雜交，沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交，不同于一般的在載片上對細(xì)胞和組織切片進(jìn)行探針雜交及檢測的原位雜交，
組織原位雜交(Tissue in situ hybridization），即原位雜交組織化學(xué)技術(shù)和原位雜交細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
原位雜交技術(shù)的基本原理
利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現(xiàn)穩(wěn)定的雙鏈區(qū)，形成雜交的雙鏈。
1.兩條核苷酸單鏈片段，熒光原位雜交，在適宜的條件下，通過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子
2.應(yīng)用帶有標(biāo)記的（有性同位素，如3H、35S、32P，原位雜交，熒光素、生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針，與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA）片段進(jìn)行雜交
3.用自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位
用原位雜交術(shù)，可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。
此方法有很高的敏感性和特異性，可進(jìn)一步從分子水來探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。
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第3年
