科銳諾生物(多圖)-植物組織RNA原位雜交技術(shù)服務(wù)
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武漢科銳諾生物科技有限公司
- 主營業(yè)務(wù):外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
- 公司官網(wǎng):www.whkrn.com
- 公司地址:湖北省武漢市江夏區(qū)神墩四路666號武漢國英種子A棟1樓
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(王經(jīng)理 先生)
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分子病理學(xué)診斷主要應(yīng)用于以下幾個(gè)方面:1、對于腫l瘤易感基因的檢測,對于腫l瘤高危人群的篩檢具有實(shí)用價(jià)值,如檢測GSTπ基因以判定個(gè)體暴露于致癌物是的致癌危險(xiǎn)性。2、腫l瘤相關(guān)病毒的檢測,如采用原位雜交方法檢測標(biāo)本中HPV、EBER等病毒。3、疑難腫l瘤的診斷和分類,尤其在鑒別診斷淋巴細(xì)胞增l生性疾病與淋巴細(xì)胞性腫l瘤上有著強(qiáng)大的特異性和可靠性。4、腫l瘤的個(gè)體化治l療,能夠根據(jù)腫l瘤發(fā)生l發(fā)展不同階段分子水平的特點(diǎn),對腫l瘤的個(gè)體化和預(yù)見性治l療具有指導(dǎo)意義。5、腫l瘤的預(yù)后判斷,如采用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)檢測HER-2基因在乳l腺l癌病例中的表達(dá)情況,配合術(shù)后治l療,指導(dǎo)臨床用藥選擇。

.雜交?。?) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉(zhuǎn)到200ml預(yù)洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養(yǎng)箱內(nèi)的旋轉(zhuǎn)平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應(yīng)緩緩搖動(dòng)濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預(yù)洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細(xì)菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強(qiáng)度和清晰度。(4) 將濾膜轉(zhuǎn)到盛有150ml預(yù)雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時(shí)用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時(shí)用42℃)下,預(yù)雜交1-2小時(shí)。(5) 將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間,盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán),植物組織RNA原位雜交技術(shù)服務(wù),以防液體蒸發(fā)。

原位雜交(in situ hybridization)將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交,稱為原位雜交,使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。
原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列,將有放1射性或非放1射性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補(bǔ)配對,結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備3個(gè)重要條件:組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物

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