實驗室采用Zetaview(品牌:Particle Metrix)進行外泌體濃度粒徑測試服務。其方法即納米顆粒跟蹤分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA),原理是對每個顆粒的布朗運動進行追1蹤和分析,結(jié)合Stockes-Einstein方程式計算出納米顆粒的流體力學直徑和濃度。NTA技術已被外泌體研究領域認可為外泌體表征手段之一;相較于其他表征方式,NTA技術的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。Zetaview包含的微電泳技術,也可進行zeta電位的檢測。
目前配備為488nm波長的激光器,且搭配對應的濾光片,胞外囊泡粒徑及濃度檢測,可以測量熒光抗1體標記的外泌體。
外泌體與微泡:我們知道,細胞間相互作用可以通過釋放蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)等分子到胞外與受體結(jié)合從而介導胞內(nèi)細胞傳導。
除此之外,細胞還可以釋放膜囊泡,外泌體與微泡就是其中兩種,二者相似但形成方式不同:外泌體是細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中的膜囊泡,而微泡則是細胞出芽與細胞膜融合后直接脫落形成的囊泡,且外泌體大小均一, 直徑在40~100 nm,其大小取決于其起源部位以及細胞中的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu);而微泡大小不一,直徑在50 ~1000 nm之間。
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