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湖北原位雜交-武漢貝科新肽科技公司-原位雜交檢測

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  • 主營業(yè)務(wù):原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間,染色體原位雜交,盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán),以防液體蒸發(fā)。

雜交結(jié)束后,去除雜交液,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次,同時應(yīng)避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時。此時已可進(jìn)行自顯影。如背景很高或?qū)嶒炓髧?yán)格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。

植物組織原位雜交的步驟包括以下幾個方面:

1. 制備組織樣品:從植物中取出需要研究的組織樣品,湖北原位雜交,如根、莖、葉等。

2. 固定組織樣品:將組織樣品固定在載玻片上,植物原位雜交,通常使用或乙醇等化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行固定。

3. 處理組織樣品:對固定的組織樣品進(jìn)行脫水、透明化、脫脂等處理,以便于DNA探針的穿透和結(jié)合。

4. 制備DNA探針:根據(jù)需要研究的基因序列,設(shè)計并合成DNA探針。DNA探針可以標(biāo)記熒光染料或性同位素,以便于檢測。

5. 雜交DNA探針:將DNA探針與組織樣品進(jìn)行雜交,通常需要在高溫下進(jìn)行,以便于DNA探針與RNA或DNA結(jié)合。

6. 檢測雜交信號:通過熒光顯微鏡或計數(shù)器等設(shè)備,檢測DNA探針與RNA或DNA的結(jié)合情況,確定目標(biāo)基因的表達(dá)模式和位置。

這一原理對于檢測一個特異的mRNA在某一種生物體,或者某些組織切片、單個細(xì)胞里具體表達(dá)位置非常有用。該技術(shù)早應(yīng)用于60年代末期,由于核酸分子雜交的特異性高,并可定位,因此該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用,例如與細(xì)胞內(nèi)RNA進(jìn)行雜交以觀察該組織細(xì)胞中特定基因表達(dá)水平。原位雜交能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響,因此對于那些細(xì)胞數(shù)量少且散在于其他組織中的細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA研究更為方便;同時由于原位雜交不需要從組織中提取核酸,原位雜交檢測,對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保持組織與細(xì)胞的形態(tài),更能準(zhǔn)確地反映出組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。

湖北原位雜交-武漢貝科新肽科技公司-原位雜交檢測由武漢貝科新肽科技有限公司提供。武漢貝科新肽科技有限公司在化學(xué)試劑這一領(lǐng)域傾注了諸多的熱忱和熱情,貝科新肽一直以客戶為中心、為客戶創(chuàng)造價值的理念、以品質(zhì)、服務(wù)來贏得市場,衷心希望能與社會各界合作,共創(chuàng)成功,共創(chuàng)輝煌。相關(guān)業(yè)務(wù)歡迎垂詢,聯(lián)系人:夏先生。

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