鐵死亡主要有以下幾個(gè)特點(diǎn):
① 鐵死亡,外泌體質(zhì)譜檢測(cè),細(xì)胞死亡過(guò)程中伴隨著大量的鐵離子的累積,同時(shí)還會(huì)出現(xiàn)脂質(zhì)過(guò)氧化,ROS升高,也有一些調(diào)控鐵穩(wěn)態(tài)和脂質(zhì)過(guò)氧化代謝等方面的基因發(fā)生變化,
② 鐵死亡,在細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)中,會(huì)出現(xiàn)比正常細(xì)胞小的線粒體,且線粒體膜皺縮,外泌體質(zhì)譜服務(wù),同時(shí)線粒體嵴減少或消失,外膜破碎,但細(xì)胞核中形態(tài)變化不明顯。
外泌體上的TNF家族蛋白不能被膜型金屬蛋白酶切割,故較為穩(wěn)定,同時(shí)借助膜形成三聚體,具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性。而且,人們認(rèn)為外泌體的轉(zhuǎn)運(yùn)TNF家族蛋白,與各種炎1癥疾病和自身免1疫疾病的產(chǎn)生相關(guān)。
例如,從類風(fēng)1濕關(guān)1節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞中釋放出來(lái)的外泌體上,聚集高濃度的膜結(jié)合型TNF-α,會(huì)加重類風(fēng)1濕關(guān)1節(jié)炎病情。
外泌體分離提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速離心法;
適用于細(xì)胞上清、灌洗液、尿液等大體積的樣品;
2、基于PEG沉淀原理的試劑盒法;
適用于血1清、腦脊液等小體積的樣品;
3、超濾提取法;
適用于細(xì)菌培養(yǎng)液或外泌體含量較低的樣品濃縮。亦可搭配超1速離心法,做進(jìn)一步的提取。
外泌體是細(xì)胞外囊泡的一種,其膜來(lái)源與粒徑范圍與細(xì)胞外囊泡相似,電鏡下,外泌體質(zhì)譜,顯示出典型的茶托狀超微結(jié)構(gòu)。實(shí)際操作中,通過(guò)常規(guī)的單一的方法很難鑒定外泌體。鑒定外泌體需要包含形態(tài)、粒徑、表面分子標(biāo)記物等多方面的鑒定。具體方法包括:透射電鏡(形態(tài)鑒定)、NTA檢測(cè)(粒徑及濃度鑒定)、WB(分子標(biāo)志物)。NTA檢測(cè)作為外泌體鑒定的經(jīng)典方法之一,可同時(shí)反映出檢測(cè)樣品的濃度及粒徑。質(zhì)量較好,純度較高的外泌體樣品,粒徑分布在30-150nm,原液濃度在10^9左右。為了保證檢測(cè)質(zhì)量,外泌體質(zhì)譜測(cè)試服務(wù),對(duì)每一個(gè)樣品,都會(huì)進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)。檢測(cè)周期為2-3個(gè)工作日,可當(dāng)天到樣當(dāng)天出結(jié)果。
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