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食品添加劑亮藍
帶金屬光澤的深紫至青銅色顆?;蚍勰o臭。耐光性及耐熱性強。對檸檬酸、酒石酸、堿穩(wěn)定。易溶于水(18.7g/100ml,21℃),0.05%中性水溶液呈清澈藍色。弱酸時呈青色,強酸時呈黃色,僅在煮沸并加堿時呈紫色。溶于乙醇(1.5g/100ml,95%乙醇溶液,21℃)。溶于甘油和丙二醇。與檸檬黃可配成綠色色素。
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考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質(zhì)含量的原理是什么
在酸性條件下,考馬斯亮蘭G-250染料與蛋白質(zhì)疏水區(qū)結(jié)合,導致da吸收峰由465 nm 變?yōu)?95 nm,同時顏色也由棕色變?yōu)樗{色,該藍色化合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度的高低成正比關(guān)系。將蛋白質(zhì)樣品或稀釋的BSA 與Bradford試劑混合,測量在595 nm處的吸收值,在建立由一系列稀釋的BSA建立的標準曲線的情況下,蛋白質(zhì)的濃度可以根據(jù)標準曲線而確定。
考馬斯亮藍G-250(Coomassie brilliant blue G-250)測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色,da光吸收在488nm;當它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?,蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長下有da光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比,因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍G-250結(jié)合在2min左右的時間內(nèi)達到平衡,完成反應十分迅速;其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。
該法是1976年Bradford建立,試劑配制簡單,操作簡便快捷,反應非常靈敏,亮藍生產(chǎn)廠家,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質(zhì)含量,測定蛋白質(zhì)濃度范圍為0~1 000μg/mL,亮藍價格,xaio可測2.5μg/mL蛋白質(zhì),是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法。
考馬斯亮藍有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍G250由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應十分迅速,常用來作為蛋白質(zhì)含量的測定??捡R斯亮藍R250與蛋白質(zhì)反應雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。
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?本考馬斯亮藍染色試劑盒(Commassie?Blue?Staining?Kit)采用了經(jīng)典的考馬斯亮藍染色和脫色方法,以考馬斯亮藍R250為染料,可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳凝膠的常規(guī)染色和脫色,或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測。?
???使用本試劑盒,采用常規(guī)染色脫色方法累計時間達到2-3小時后可以觀察到蛋白條帶;采用快速染色脫色方法20分鐘左右即可觀察到蛋白條帶。觀察到清晰的蛋白條帶則需染色脫色更長時間。?
???本試劑盒中的染色液和脫色液經(jīng)過改良,不含有毒的jia醇,但含有刺激性氣味的yi酸。
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