核酸原位雜交可根據(jù)其檢測(cè)物而分為細(xì)胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交;根據(jù)其所用探針及所要檢測(cè)核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過(guò)組織細(xì)胞的固定,染色體原位雜交,預(yù)雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。
我們?cè)谶@兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對(duì)細(xì)胞和組織切片進(jìn)行探針雜交及檢測(cè)的原位雜交,
原位雜交技術(shù)的定義和基本原理原位雜交技術(shù)是一種基于核酸分子雜交原理,將標(biāo)記的核酸探針與生物組織或細(xì)胞中的DNA或RNA進(jìn)行特異性結(jié)合,從而在細(xì)胞水平上檢測(cè)目標(biāo)核酸序列分布的技術(shù)。原位雜交技術(shù)的基本原理是利用DNA或RNA的互補(bǔ)性,通過(guò)加熱或化學(xué)反應(yīng)使探針與組織或細(xì)胞中的目標(biāo)核酸序列形成雙鏈復(fù)合物,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)核酸序列的定位。
把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后,把濾膜(編號(hào)面朝上)放在一張保鮮膜上,并在保鮮膜上作幾個(gè)不對(duì)稱的標(biāo)記,以使濾膜與性自顯影片位置對(duì)應(yīng)。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時(shí)。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標(biāo)記陽(yáng)性雜交信號(hào)的位置,同時(shí)在不對(duì)稱分布點(diǎn)的位置上作出標(biāo)記。可從底片上取下透明紙,通過(guò)對(duì)比紙上的點(diǎn)與瓊脂上的點(diǎn)來(lái)鑒定陽(yáng)性菌落。
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