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熒光原位雜交技術-貝科新肽(推薦商家)

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DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比,DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強度較弱,因此在雜交后的洗滌中不應使用甲醛。

探針特異性至關重要。如果已知細胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列,則可據此設計高度的互補探針。如果超過 5% 的堿基對不互補,那么探針只能與靶序列發(fā)生輕度雜交。這意味著,熒光原位雜交技術,探針更容易在洗滌和檢測步驟中被洗去,可能無法正確檢測。

核酸原位雜交可根據其檢測物而分為細胞內原位雜交和組織切片內原位雜交;根據其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經過組織細胞的固定,預雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結果。

我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對細胞和組織切片進行探針雜交及檢測的原位雜交,

和其它實驗方法一樣,必須同時設對照試驗以證明其實驗結果特異性。對照試驗的設置須根據核酸探針和靶核苷酸的種類和現有的可能條件去選定。ISHH的優(yōu)點是它的高度特異性,它可測定組織、培養(yǎng)的單個細胞或細胞提取物中的核苷酸含量。應用高敏感度的性標記cRNA探針在理想的ISHH的實驗條件下檢測mRNA,其敏感度可達到20個mRNA拷貝/每個細胞。由于雙鏈DNA的穩(wěn)定性,在用ISHH定位DNA時很少發(fā)生丟失,降解,其敏感性高到能夠顯示在染色體鋪片上,有時甚至在組織切片上的單個基因拷貝。正因為如此,對ISHH結果的解釋應持慎重態(tài)度,特別是前人未報告過的新發(fā)現。

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