分子病理技術(shù)服務(wù)-科銳諾(在線咨詢)

詢盤(pán)留言 |投訴|申領(lǐng)|刪除 產(chǎn)品編號(hào)：604339541 更新時(shí)間：2025-11-16

武漢科銳諾生物科技有限公司

主營(yíng)業(yè)務(wù)：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
公司官網(wǎng)：www.whkrn.com
公司地址：湖北省武漢市江夏區(qū)神墩四路666號(hào)武漢國(guó)英種子A棟1樓

業(yè)務(wù)熱線： 18627856353 (王經(jīng)理先生)

產(chǎn)品詳情
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供貨總量 : 不限
價(jià)格說(shuō)明 : 議定
包裝說(shuō)明 : 不限
物流說(shuō)明 : 貨運(yùn)及物流
交貨說(shuō)明 : 按訂單

原位雜交雜交液注意事項(xiàng)：

（1）雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外，還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。

（2）雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加，可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。甲酰胺可使Tm降低，雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA：RNA，RNA：DNA，DNA：DNA的雜交溫度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以雜交液中加入適量的甲酰胺，可避免因雜交溫度過(guò)高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結(jié)合，從而減少雜交液的有效容積，提高探針有效濃度，以達(dá)到提高雜交率的目的（尤其對(duì)雙鏈核酸探針）。

在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等，都是為了阻斷探針與組織結(jié)構(gòu)成分之間的非特異性結(jié)合，以減低背景。

原位雜交天

1. 重新水化和固定

1）吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。

2）置換成30%的PBST溶液，放置5分鐘

3）置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復(fù)一次

4）置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘5）用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。

蛋白酶處理與后固定（本實(shí)驗(yàn)不做此步）

1）用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時(shí)的胚胎處理3分鐘，24小時(shí)以上的胚胎處理5分鐘或者更長(zhǎng)。發(fā)育時(shí)間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時(shí)間長(zhǎng)的胚胎就需要用蛋白酶來(lái)疏松組織，以便于雜交。

2）用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。

3）用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，分子病理技術(shù)服務(wù)，室溫。

4）用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。

2. 預(yù)雜交

1）每個(gè)管中置換成大約300ulHYB－溶液，60℃水浴5分鐘，避免振蕩。

2）用等體積的HYB+取代HYB－。

3）60℃水浴，預(yù)雜交4小時(shí)以上。

3. 雜交

1）吸去預(yù)雜交的HYB+，加上100ul已加入探針的HYB+溶液（探針濃度約為1ng/ul）..

2）60℃ 溫浴過(guò)夜。注：雜交與預(yù)雜交的溫度可以是55到60度不等，溫度越低，探針結(jié)合越好，溫度越高，背景越小。

分子病理學(xué)診斷主要應(yīng)用于以下幾個(gè)方面：1、對(duì)于腫l瘤易感基因的檢測(cè)，對(duì)于腫l瘤高危人群的篩檢具有實(shí)用價(jià)值，如檢測(cè)GSTπ基因以判定個(gè)體暴露于致癌物是的致癌危險(xiǎn)性。2、腫l瘤相關(guān)病毒的檢測(cè)，如采用原位雜交方法檢測(cè)標(biāo)本中HPV、EBER等病毒。3、疑難腫l瘤的診斷和分類，尤其在鑒別診斷淋巴細(xì)胞增l生性疾病與淋巴細(xì)胞性腫l瘤上有著強(qiáng)大的特異性和可靠性。4、腫l瘤的個(gè)體化治l療，能夠根據(jù)腫l瘤發(fā)生l發(fā)展不同階段分子水平的特點(diǎn)，對(duì)腫l瘤的個(gè)體化和預(yù)見(jiàn)性治l療具有指導(dǎo)意義。5、腫l瘤的預(yù)后判斷，如采用熒光原位雜交技術(shù)（FISH）檢測(cè)HER-2基因在乳l腺l癌病例中的表達(dá)情況，配合術(shù)后治l療，指導(dǎo)臨床用藥選擇。

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